有人提出抑制壓力相關(guān)的情緒反應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致同時(shí)激活自主神經(jīng)系統(tǒng)（ANS）的交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)系統(tǒng)，并且這些情緒狀態(tài)的表達(dá)對潰瘍形成具有保護(hù)作用。本研究旨在研究大鼠壓力引起的磨牙癥活動(dòng)（SBA）。評(píng)估應(yīng)激期間咀嚼肌EMG活動(dòng)和SBA的生理影響，例如各種組織和器官應(yīng)激引起的變化。

材料和方法

動(dòng)物

       在控制溫度（22±3℃）和照明條件（12:12小時(shí)光照：黑暗循環(huán)）下，將35只雄性Wistar大鼠（7-8周齡）分組飼養(yǎng)（每籠5只），提供食物和水。為了避免晝夜變化帶來的激素變化對細(xì)胞因子表達(dá)的影響，我們在1000-1500小時(shí)之間進(jìn)行了所有實(shí)驗(yàn)。

約束應(yīng)激和SBA測量

       通過將大鼠仰臥位固定在木板（18×25cm）上形成約束應(yīng)激（20只大鼠）。四條腿都用膠帶固定在身體中線45°的方向。實(shí)驗(yàn)組大鼠暴露于約束應(yīng)激360分鐘。對照組大鼠沒有暴露于約束條件，且能夠自由獲取食物和水（15只大鼠）。

        為了記錄SBA的長度，將針狀電極直接插入雙側(cè)咬肌以供EMG（EMG，SN700，Tecno Science，Tokyo，Japan）記錄。肌電圖顯示肌肉活動(dòng); 我們測量了SBA的持續(xù)時(shí)間。

標(biāo)本的制備

       在360分鐘的約束后，在全身麻醉下通過心臟穿刺抽血。取血樣并在室溫下凝結(jié)10分鐘，然后離心以獲得血清樣品。立即儲(chǔ)存等分的血清并在-80℃下冷凍直至使用。取出脾臟和胸腺并稱重（濕重），然后在10％福爾馬林溶液中浸泡固定，隨后進(jìn)行組織學(xué)切片以觀察組織學(xué)變化。胃也被移除以評(píng)估潰瘍形成。

測量胃部病變

       沿著大彎將胃剖開，并作為新鮮標(biāo)本固定在紙板上。在新鮮時(shí)，通過解剖顯微鏡評(píng)估胃損傷的嚴(yán)重程度。評(píng)分包括發(fā)紅區(qū)域的數(shù)量和累積長度以及充滿凝血的離散腺體病變。我們還使用視覺分析系統(tǒng)（WinRoof，5.5版，日本東京都三谷商事;圖1）測量了胃粘膜的發(fā)紅區(qū)域（RAS）。記錄每只動(dòng)物最不發(fā)白以及胃粘膜表面紅潤部分的不同顏色值（即紅色，綠色和藍(lán)色）。通過最發(fā)白區(qū)域值減去最發(fā)紅區(qū)域值來計(jì)算截止值。這種差異被分成兩半，并加到最高的紅色值。然后，粘膜表面的紅色區(qū)域被視為RAS。在RAS可視化之后，將胃浸入10％福爾馬林溶液中，然后進(jìn)行組織學(xué)切片以觀察組織學(xué)變化。

測量血液腎上腺素和皮質(zhì)醇水平

       分析血清樣品以評(píng)估腎上腺素和皮質(zhì)醇水平。皮質(zhì)醇水平用皮質(zhì)醇放射免疫測定法（RIA）試劑盒（Immunotech，USA），使用如前所述的抗皮質(zhì)醇小鼠單克隆抗體測定。

       用高效液相色譜法分離兒茶酚胺（特別是血中的腎上腺素）。樣品通過陽離子交換預(yù)柱通過以除去水溶性物質(zhì)，然后使用HLC-8030柱（Toso，Tokyo，Japan）分離兒茶酚胺。之后，測量由二苯基乙二胺和鐵氰化鉀產(chǎn)生的熒光，其中激發(fā)波長λex= 355nm，發(fā)射波長λem= 470nm。

測量血液白細(xì)胞

       血液白細(xì)胞，特別是中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的比例，是交感神經(jīng)系統(tǒng)免疫應(yīng)激反應(yīng)的指標(biāo)。對于白細(xì)胞部分，通過外周血涂片（Wright-Giemsa染色）和顯微鏡細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)估嗜中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。計(jì)算白細(xì)胞部分中嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的比例。

結(jié)果

SBA

       約束應(yīng)激動(dòng)物顯示出一定長度的SBA，非應(yīng)激動(dòng)物不顯示SBA。將大鼠的活動(dòng)錄像。這項(xiàng)研究是在9:00至15:00期間完成的，對大鼠來說這不是一個(gè)活躍的時(shí)間。在這段時(shí)間內(nèi)，未被約束的大鼠多半會(huì)睡覺或吃東西。盡可能地排除與進(jìn)食和飲食有關(guān)的咬肌活動(dòng)。在6小時(shí)的束縛應(yīng)激中，個(gè)體SBA從19.77分鐘到1.37分鐘（0.23-3.30分鐘/小時(shí)）不等（圖2）。平均SBA在此期間為8.06±5.02分鐘。

肉眼觀察脾臟和胸腺

脾和胸腺明顯受到約束應(yīng)激的影響。與對照組相比，經(jīng)歷6小時(shí)約束應(yīng)激的大鼠的脾臟和胸腺重量顯著較低（P = 0.05）（圖3）。在組織學(xué)和肉眼觀察中，觀察到相對于對照組，胸腺皮質(zhì)減少，胸腺骨髓增加以及白脾髓減少（圖3）。然而，胸腺和脾臟的重量與SBA持續(xù)時(shí)間成正比增加; 胸腺（P = 0.032）和脾臟（P = 0.0002）的這種相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖4）。

SBA和血液白細(xì)胞

在360分鐘的束縛應(yīng)激中，中性粒細(xì)胞的百分比逐漸增加，而淋巴細(xì)胞的百分比逐漸減少（圖5）。血液白細(xì)胞中的嗜中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的比例在束縛應(yīng)激的240分鐘時(shí)反轉(zhuǎn)，并持續(xù)至試驗(yàn)結(jié)束。相反，SBA減弱了應(yīng)激誘導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞平衡變化（圖6）。

SBA，血液腎上腺素和皮質(zhì)醇水平

束縛應(yīng)激的大鼠顯示相對于對照組大鼠的皮質(zhì)醇和腎上腺素水平增加（1.20±0.30），盡管這些增加被SBA減弱（圖7）。血中腎上腺素水平與血液白細(xì)胞中性粒細(xì)胞百分比顯著相關(guān)（R =0.604，P<0.01;圖8）。 RAS和中性粒細(xì)胞在血液白細(xì)胞中的百分比也有很強(qiáng)的相關(guān)性（R = 0.835，P<0.01;圖8）

SBA和潰瘍形成

6小時(shí)的束縛應(yīng)激后，形成各種胃潰瘍（圖9a）。 SBA持續(xù)時(shí)間與RAS顯著相關(guān)（R = -0.6746，P<0.01），表明SBA對應(yīng)激性潰瘍形成有保護(hù)作用（圖9b）。

結(jié)論

        這項(xiàng)研究表明，SBA可減輕應(yīng)激引起潰瘍的發(fā)生以及胸腺和脾臟的退行性改變。同時(shí)，SBA減少了血液中腎上腺素，皮質(zhì)醇和嗜中性粒細(xì)胞的釋放或增加?？傊?，暴露于應(yīng)激的情況下，通過SBA，減弱了應(yīng)激誘發(fā)的ANS應(yīng)答，包括胃潰瘍形成。

討論

        以前的研究證實(shí)了咀嚼功能障礙對抑制應(yīng)激誘導(dǎo)的神經(jīng)生理反應(yīng)變化的下調(diào)作用。例如，束縛應(yīng)激時(shí)，大鼠下丘腦和室旁核中Fos表達(dá)，自由基消耗，磷酸化ERK1/2表達(dá)，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子表達(dá)和神經(jīng)元一氧化氮合酶表達(dá)增加。

        本研究是針對SBA而不是人為咬合的效果，并支持如下觀念，即情緒狀態(tài)的變化反映在肌肉緊張，特別是咀嚼肌緊張。

       可以推測，咬合行為將轉(zhuǎn)移壓力情境產(chǎn)生的消極情緒（焦慮和/或恐懼），從而減少壓力造成不利影響。如果這個(gè)假設(shè)適用于人類，那么通過像睡眠磨牙癥這樣的應(yīng)對機(jī)制，可能對減少神經(jīng)官能癥的發(fā)生有益，如應(yīng)激產(chǎn)生的潰瘍或神經(jīng)疾病。

來源：浙一口腔正畸林軍