正畸文獻閱讀--青少年結束正畸治療后齦下菌斑生物膜微生物種類分析

摘要：

背景：

固定正畸治療是錯合畸形最常見的矯治方式，但其有并發(fā)牙周問題的風險。青少年在正畸治療后的微生物及臨床表現(xiàn)的改變是否可逆，仍是未知的。

方法：

20位曾接受正畸治療的青少年被納入實驗組，19位牙周健康的青少年被納入對照組。在初始時間點（T0）進行牙周檢查，指標參數(shù)包括牙齦指數(shù)（GI），齦溝深度（PD），齦溝出血指數(shù)（SBI），收集下切牙的齦下菌斑樣品。通過real-timePCR測定伴放線放線桿菌（A.a），牙齦卟啉單胞菌（P.g），中間普氏菌（P.i），福賽坦氏菌（T.f）和總細菌量。這些檢測將在1月后（T1）3個月后（T2）重新測定。

結果：

初始時間點（T0）實驗組的臨床指標（包括GI,PD, SBI）顯著高于對照組(P<0.05 or P<0.01)。在3個月后實驗組和對照組之間的GI和SBI之間無明顯差異。實驗組牙周細菌的檢出率和數(shù)量趨于正常（P＞0.05），PD及P.i總量仍顯著高于対照組（P<0.05 or P<0.01）。

結論：

去除矯治器后，正畸治療所導致的牙周病變在3月后僅有部分能夠恢復。

介紹：

固定正畸治療一個常見的副作用就是牙周并發(fā)癥，包括牙齦炎和牙周炎。有研究指出正畸治療造成的牙齦改變是暫時的，可逆的，另外一些學者報道了正畸治療造成的明顯的牙周附著喪失，且不可逆轉。一項前瞻性研究顯示，正畸矯治器對牙周有負面的影響，而病變僅有部分能夠逆轉。

齦下菌斑中的厭氧微生物是引發(fā)和促進牙齦炎牙周炎的關鍵致病因素。牙周病研究領域認為牙周疾病的發(fā)生是由于牙周細菌相對豐富度與宿主防御系統(tǒng)平衡被打破。牙周病與許多種細菌有關，如伴放線放線桿菌（A.a），牙齦卟啉單胞菌（P.g），中間普氏菌（P.i），福賽坦氏菌（T.f）。其中T.f和P.g與牙周疾病嚴重度有關，而A.a和P.i是牙周病的次級有害菌種。另外，當前有證據(jù)顯示正畸矯治器能夠改變微生物生態(tài)系統(tǒng)的平衡，增加微生物生態(tài)系統(tǒng)對病原菌的易感性。因此，理解牙周致病菌在正畸治療過程中的構成和改變是非常重要的，這可以幫助我們避免那些不可逆的牙周損傷。

材料與方法：

倫理證明：該研究經山東大學口腔醫(yī)學院及濟南口腔醫(yī)學倫理委員會批準。

樣本：

實驗組及對照組選擇2015年6月至2015年10月至濟南口腔醫(yī)院正畸就診的患者。實驗組包括20位青少年患者（8位男性，12位女性，平均年齡14.42±0.86歲），經過了17.9-22.9個月的固定正畸治療，在治療前無牙齦炎或牙周炎的臨床表現(xiàn)。對照組包括19位牙周健康的青少年（9位男性，10位女性，平均年齡14.42±0.62歲），無正畸治療經歷。納入標準如下：1.不抽煙；2.無系統(tǒng)性疾病；3.X線下午明顯牙槽骨喪失；4.無固定修復體或活動義齒；5.實驗開始前3個月內不可使用抗生素；6.實驗開始之前6個月內未行牙周治療。所有參與者接受了同一位正畸醫(yī)生的標準口腔衛(wèi)生宣教。實驗組在去除了固定矯治器后選擇上下頜哈雷氏保持器保持。

臨床檢測：

收集下頜前牙31,32,41,42的臨床數(shù)據(jù)，包括GI，PD，SBI。每個參與者的得分均為4顆前牙的平均數(shù)。共測量3個時間點，包括初始時間點T0，即剛去除矯治器即刻；T1，去除矯治器后1個月；T3，去除矯治器后3個月。

牙周檢測和樣本收集均由同一正畸醫(yī)生完成。探診深度在每顆牙上檢測三個位置，包括頰側的近中，中部及遠中，利用牙周探針檢測牙齦邊緣到牙周袋或齦溝底的深度。

微生物取樣：

    要求參與者在取樣前兩小時內不能進食或飲水。從下頜前牙，31,32,41,42采集齦下微生物樣品，取樣前，仔細去除牙齦上菌斑，用無菌棉卷和空氣干燥分離取樣部位。用一個無菌濾紙條插入牙周袋中，直到遇到輕微的阻力，放置30秒后取出，放入含有0.5mlPBS的無菌離心管中，保存在-20℃下。

為什么選擇下切牙作為取樣的位置？因為1）后牙和前牙均有較高的牙周病發(fā)病率，均可作為微生物研究的代表，而選擇前牙能夠夠更好地避免唾液的干擾；2）正畸患者后牙和尖牙常發(fā)生牙齦增生現(xiàn)象，這是牙齒移動和正畸力造成的而不是牙齦炎，因此這些部位的臨床檢查數(shù)據(jù)和微生物檢測結果會不一致；3）牙周檢查中常用16,21,24,36,41,44這些牙位來反應全口的情況，而在嚴重擁擠的患者中常選擇拔除雙尖牙，因此24,44有可能缺失，加上16,36常因為牙齒移動和正畸力而出現(xiàn)牙齦增生的情況，因為我們只能選擇下切牙作為取樣的位置。

定量PCR檢測：

引物如下：

數(shù)據(jù)分析：

采用SPSS20.0對數(shù)據(jù)進行分析，F(xiàn)isher精確檢驗和獨立t檢驗分析兩組性別和年齡的差異。Log10轉化用于描述微生物的數(shù)據(jù)，為了使分布和差異穩(wěn)定。臨床牙周參數(shù)和微生物數(shù)據(jù)的的描述使用中位數(shù)，第二十五百分位數(shù)（Q1），和第七十五百分位（Q3）。

Mann-Whitney U檢驗和Wilcoxon秩和檢驗比較組內和組間的差異，F(xiàn)isher精確檢驗對牙周致病菌的患病率兩兩比較。

結果：

兩組成員間性別和年齡無顯著差異。

Real-timePCR引物的特異性檢測

為確定PCR引物的特異性，分別用5對引物對4株目標菌株的重組質粒DNA進行檢測，結果表面所有特異性引物只能擴增正確的目標DNA，無交叉反應。而通用引物可擴增出四種菌株。

4種細菌的患病率

 四種牙周致病菌的患病率顯示如圖1:。在基礎時間點（T0）上，實驗組的A.a和P.g的檢出率分別為89.5%和94.73%，與對照組相比無明顯差異。然而兩組中P.i的檢出率有顯著性差異，實驗組有94.73%，而對照組只有31.58%。實驗組的T.f檢出率有63.16%，而對照組有26.31%。這兩種細菌的檢出率上反應出實驗組對照組顯著性差異。

    去除矯治器3個月后（T2），實驗組的細菌檢出率分別為A.a 89.5%，P.g73.68%，P.i52.63%，T.f47.39%，與對照組相比均無顯著性差異。實驗組P.i的檢出率在基礎時間點（T0）直至去除矯治器3個月后（T2）這段時間內有顯著降低。

臨床標本檢測：

絕對的細菌數(shù)量計數(shù)通過Log10轉化來實現(xiàn)，細菌比例由單個細菌數(shù)除以總細菌數(shù)來計算。

結果顯示T0時間點上，實驗組的細菌計數(shù)和比例分別是P.g3.49和0.39%，P.i3.99和1.21%，T.f3.34和0.13%，顯著高于健康對照組。T2時間點上，實驗組P.g 1.72和0.8%，P.i 3.65和1.14%，T.f 3.01和0.12%，均表現(xiàn)為顯著減少。而實驗組的A.a在T0與T2相比，無顯著性差異，與對照組相比也無差異。實驗組總細菌數(shù)在T1，T2時間點上，與T0相比顯著減少。

臨床檢查數(shù)據(jù)分析：

初始時間點T0上，實驗組GI,PD,SBI均顯著高于對照組，而去除矯治器后，隨時間推移，從T0到T2數(shù)據(jù)顯著下降。T2時間點上，兩組之間GI和SBI無顯著差異，實驗組PD仍稍高于健康對照組。

討論：

我們的臨床檢查參數(shù)顯示去除矯治器后牙周狀態(tài)有很顯著的改善。Van等人的研究報道了矯治去除后PD和BOP會有顯著減少，但仍高于正畸治療前。我們的數(shù)據(jù)與該研究類似，去除矯治器3個月后，PD仍顯著高于健康對照組?？赡艿脑蚴牵琍D的增加是有牙齦結締組織纖維改變造成的，當去除刺激因素，如菌斑，弓絲，托槽，并不能將牙齦組織逆轉為原本的樣子。

我們的對細菌的檢測顯示，實驗組與對照組之間A.a檢出率及菌量無明顯差異，而P.g，P.i 及T.f 有顯著性差異，且在去除矯治器后這三種細菌的檢出率及菌量均有所減少。這坑是因為A.a是一種革蘭氏陰性兼性厭氧菌，而其余3種為專性厭氧菌，牙齦增生所造成的生態(tài)環(huán)境更有利于專性厭氧菌的生存。

我們的研究發(fā)現(xiàn)T0時間點上，兩組的總細菌量無顯著性差異，而不同細菌的量或比例由顯著增高。這說明了牙周疾病是由特定微生物造成的，與微生物數(shù)量增加無關。牙周致病菌可在健康人牙周中檢測到，但他們可能是機會致病菌，其比例上升到特定閾值即可誘發(fā)牙周組織損害。

結論：

去除矯治器后，齦下菌斑中的P.i，P.g，T.f有所減少，同時臨床表現(xiàn)有所改善。但其中PD及P.i并無明顯改善，因此正畸治療所導致的牙周病變在去除矯治器3個月后僅有部分能恢復。

來源：浙一口腔正畸林軍